PBS緩沖液(磷酸鹽緩沖鹽溶液)是生物學實驗中常用的基礎溶液,其制備工藝主要包括以下步驟和注意事項:
1.配方組成
主要成分:包括氯化鈉(NaCl)、氯化*(KCl)、磷酸氫二鈉和磷酸二氫鉀。這些成分共同維持穩定的pH環境,并提供適當的離子強度。部分特殊用途的PBS還會添加吐溫-20或雙價陽離子。
常見濃度:若需其他pH值,可通過調整磷酸鹽的比例實現。
2.PBS緩沖液配制步驟
預處理容器與工具:徹*清洗所需的燒杯、量筒、轉子等器材,避免雜質干擾。可先用去離子水潤洗并晾干備用。
溶解磷酸鹽組分:向燒杯中加入約800mL去離子水,依次稱量并加入規定的磷酸氫二鈉和磷酸二氫鉀。將燒杯置于磁力攪拌器上,利用轉子輔助充分溶解。注意不同水合物形式的換算,需根據實際使用的晶體形態調整稱量質量。
調節pH值:使用pH計監測溶液酸堿度,緩慢滴加濃鹽酸或氫氧化鈉溶液至目標pH。此步驟需謹慎操作,邊加邊攪拌以確保均勻混合。某些情況下也可通過預配不同比例的磷酸鹽儲備液來直接獲得所需pH。
定容與混勻:待pH穩定后,將溶液轉移至容量瓶中,用去離子水定容至1L刻度線,再次攪拌均勻以保證各成分分布均勻。
滅菌處理(可選):若用于細胞培養等無菌要求較高的場景,建議進行高溫高壓滅菌,隨后于4℃冰箱保存備用。
3.PBS緩沖液母液稀釋法
高效批量制備:實驗室常先配制10倍濃縮的PBS母液,使用時按比例稀釋即可快速獲得工作濃度溶液。
4.關鍵控制點
水質要求:必須使用高純度的去離子水,避免水中離子影響緩沖體系的精確性。
溫度敏感性:低溫可能導致磷酸鹽析出結晶,因此冬季配制時應適當提高環境溫度或減少單次配制量。
儲存穩定性:長期存放后可能出現沉淀,使用前應重新搖勻;若發現渾濁現象,則表明已被污染需重新配制。
