考馬斯藍染色法(coomassie blue staining)又稱Bradford法,是 Bradford 于 1976 年建立起來的一種蛋白質濃度的測定方法。蛋白質濃度測定的方法有很多,考馬斯亮藍測定蛋白質是實驗室最常見的一種方式,它利用比色法和色素法混合方法、操作簡便。
考馬斯亮藍法測定蛋白質濃度的原理
考馬斯亮藍(Coomassie Brilliant Blue)法測定蛋白質濃度,是利用蛋白質―染料結合的原理,定量的測定微量蛋白濃度的快速、靈敏的方法。這種蛋白質測定法具有超過其他幾種方法的突出優點,因而正在得到廣泛的應用。這一方法是目前靈敏度最高的蛋白質測定法。
考馬斯亮蘭G-250染料,在酸性溶液中與蛋白質結合,使染料的最大吸收峰(lmax)的位置,由465nm變為 595nm,溶液的顏色也由棕黑色變為蘭色。通過測定595nm處光吸收的增加量可知與其結合蛋白質的量。研究發現,染料主要是與蛋白質中的堿性氨基酸(特別是精氨酸)和芳香族氨基酸殘基相結合。
考馬斯亮藍染色法法注意事項
1.在試劑加入后的5-20min內測定光吸收,因為在這段時間內顏色是更穩定的。
2.測定中,蛋白-染料復合物會有少部分吸附于比色杯壁上,測定完后可用乙醇將藍色的比色杯洗干凈。
3.利用考馬斯亮藍法分析蛋白必須要掌握好分光光度計的正確使用,重復測定吸光度時,比色杯一定要沖洗干凈,制作蛋白標準曲線的時候,蛋白標準品最好是從低濃度到高濃度測定,防止誤差。
北京索萊寶科技有限公司是一家集產品研發、生產、銷售、服務于一體的高科技生物企業。產品主要涵蓋生化試劑、分子生物學試劑、細胞培養、免疫學產品及實驗耗材等。考馬斯亮藍染色液為索萊寶自產產品,其貨號為P1305。本考馬斯亮藍染色套裝(Commassie Blue Staining Kit)采用了經典的考馬斯亮藍染色和脫色方法,以考馬斯亮藍G-250為染料,可用于SDS-PAGE或非變性PAGE等蛋白電泳凝膠的常規染色和脫色,或Western轉膜后PAGE膠上殘余蛋白的檢測。