活性氧檢測試劑盒(Reactive Oxygen Species Assay Kit)是一種利用熒光探針 DCFH-DA進(jìn)行活性氧檢測的試劑盒。DCFH-DA 本身沒有熒光,可以自由穿過細(xì)胞膜,進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)后,可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解生成DCFH。而 DCFH 不能通透細(xì)胞膜,從而使探針很容易被裝載到細(xì)胞內(nèi)。細(xì)胞內(nèi)的活性氧可以氧化無熒光的DCFH 生成有熒光的DCF 。檢測DCF 的熒光就可以知道細(xì)胞內(nèi)活性氧的水平。
對(duì)于原位裝載探針的樣品可以用激光共聚焦顯微鏡直接觀察,或收集細(xì)胞后用熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀檢測。對(duì)于收集細(xì)胞后裝載探針的樣品可以用熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀檢測,也可以用激光共聚焦顯微鏡直接觀察。
注意事項(xiàng):
探針裝載后,一定要洗凈殘余的未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的探針,否則會(huì)導(dǎo)致背景較高。
探針裝載完畢并洗凈殘余探針后,可以進(jìn)行激發(fā)波長的掃描和發(fā)射波長的掃描,以確認(rèn)探針的裝載情況是否良好。DCF 的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜請參考上圖。
盡量縮短探針裝載后到測定所用的時(shí)間(刺激時(shí)間除外),以減少各種可能的誤差。
為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。