丙二醛（MDA）含量檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC0025
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：
MDA檢測工作液的配制：臨用前取1瓶試劑二加入20mL試劑一，溶解混勻，2-8℃保存一個月。MDA檢測工作液較難溶解，可以70℃加熱，并劇烈振蕩以促進溶解，或者通過超聲處理以促進溶解。
產(chǎn)品說明：
氧自由基作用于脂質(zhì)的不飽和脂肪酸，生成過氧化脂質(zhì)；后者逐漸分解為一系列復雜的化合物，其中包括丙二醛（MDA）。通過檢測MDA的水平即可檢測脂質(zhì)氧化的水平。
丙二醛（MDA）在酸性和高溫條件下，可以與硫代巴*（thiobarbituric acid，TBA）縮合，生成棕紅色的三甲川（3,5,5-三甲基惡唑-2,4-*酮），其最大吸收波長在532nm。進行比色后可估測樣本中MDA的含量。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件

實驗實例：

1. 取馬血清按照測定步驟操作，用96孔板測得計算ΔA532=A532_測定-A532_空白=0.078-0.047=0.031，ΔA600=A600_測定-A600_空白=0.053-0.043=0.01，ΔA=ΔA532-ΔA600=0.021按體積計：

MDA含量（nmol/mL）=53.763×ΔA×F =1.129 nmol/mL。

1. 取500萬hela細胞，加1mL提取液進行樣本處理，離心取上清后按測定步驟操作，用96孔板測得計算ΔA532=A532_測定-A532_空白=0.101-0.046=0.055，ΔA600=A600_測定-A600_空白=0.043-0.043=0，ΔA=ΔA532-ΔA600 = 0.055，按照細菌或細胞數(shù)量計算：

MDA含量（nmol/10⁴ cell）=0.1075×ΔA×F =0.006nmol/10⁴ cell

1. 取0.1g 小鼠肝臟，加1mL提取液進行樣本處理，離心取上清后按測定步驟操作，用96孔板測得計算ΔA532=A532_測定-A532_空白=0.196-0.047=0.149，ΔA600=A600_測定-A600_空白=0.125-0.043=0.082，ΔA=ΔA532-ΔA600= 0.067，按照樣本質(zhì)量計算：

MDA含量（nmol/g 質(zhì)量）= 53.763×ΔA÷W×F =36.02 nmol/g 質(zhì)量

參考文獻：
[1] Spitz D R , Oberley L W . An assay for superoxide dismutase activity in mammalian tissue homogenates[J]. Analytical Biochemistry,1989
[2] Masayasu M , Hiroshi Y . A simplified assay method of superoxide dismutase activity for clinical use[J]. Clinica Chimica Acta.
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