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專注于生物學試劑及試劑盒領域
服務熱線：18101056239
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產品型號：BC2170
更新時間：2022-08-07
廠商性質：生產廠家
訪 問 量 ：1689
010-50973130
產品分類
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線粒體檸檬酸（MCA）含量測試盒 三羧酸循環
線粒體檸檬酸（MCA）含量檢測試劑盒說明書 紫外分光光度法
注意：正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。
貨號：BC2170
規格：25T/24S
產品內容：
酸性提取液：液體 25 mL×1 瓶，4℃保存。
堿性提取液：液體 25 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 7.5mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 2.5mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 7.5mL 蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑 4℃保 存。
標準品：液體 1mL×1 支，10µmol/mL 檸檬酸標準液，4℃保存。
產品說明： CA 是線粒體三羧酸循環的第1個中間產物，由檸檬酸合酶催化乙酰 CoA 與草酰乙酸合成，其 含量是三羧酸循環強度的主要指標之一。 CA 在檸檬酸裂解酶的作用下，生成α-酮酸（草酰乙酸）；在弱酸性條件下，α-酮酸進一步與苯 肼反應，生成相應的α-酮酸苯腙；α-酮酸苯腙在 330nm 處有吸收峰，該波長下吸光度的變化程度可 反應出 CA 的含量。
自備儀器和用品： 紫外分光光度計、水浴鍋、可調式移液槍、1mL 石英比色皿、研缽和蒸餾水。
操作步驟：
一、線粒體中檸檬酸提取：
1. 稱約 0.05-0.1g 組織（建議稱 0.1g 樣本），加入 0.5mL 酸性提取液，冰上充分研磨，600g/min 4℃ 離心 5min，取上清另一 EP 管中，11000g/min 4℃離心 10min，棄上清（取 300µL 該上清液和 300µL 堿性提取液中和后可用于細胞質 CA 含量測定）；
沉淀即線粒體，向沉淀中加入 0.5mL 酸 性提取液，充分懸浮溶解，超聲波破碎（功率 20%，超聲 3 秒，間隔 10 秒，重復 30 次），取此 溶液 300µL 和 300µL 堿性提取液中和，混勻，置冰上待測（不可用于蛋白質含量測定）。
相關文獻：
《Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis》 作者:Meixi Peng, Dan Yang, Yixuan Hou, Shuiqing Liu, Maojia Zhao, Yilu Qin, Rui Chen, Yong Teng & Manran Liu 期刊:Cell Death and Disease 影響因子:5.959 PMID:30850587
線粒體檸檬酸（MCA）含量測試盒 三羧酸循環
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